Kính hiển vi huỳnh quang & Hình ảnh tế bào

Kính hiển vi là trọng tâm của việc tìm hiểu kiến ​​trúc mô, cấu trúc tế bào và động lực học, cũng như chức năng phân tử. Kính hiển vi huỳnh quang thường được sử dụng để xác định thông tin không gian và cấu trúc liên kết về tế bào và mô. Thiết bị hiển vi quét laser tinh vi, máy ảnh kỹ thuật số siêu nhạy và đầu dò huỳnh quang chuyên dụng giúp bạn có thể hình dung các sự kiện tế bào trong thời gian thực ở cấp độ phân tử.

kính hiển vi huỳnh quang đang được sử dụng

Tài nguyên được chia sẻ hình ảnh tế bào và kính hiển vi huỳnh quang nâng cao chất lượng nghiên cứu ung thư bằng cách tạo ra thiết bị và phần mềm hiện đại có sẵn để tạo hình ảnh huỳnh quang định lượng, đa tỷ lệ và đa phương thức.

Tiến bộ Nghiên cứu Ung thư Xuất sắc

Hình ảnh NueronsTài nguyên được chia sẻ hình ảnh tế bào và kính hiển vi huỳnh quang hỗ trợ các nhà nghiên cứu cơ bản và bác sĩ hình ảnh các mẫu và xuất bản các bài báo nổi bật về:

  • Làm sáng tỏ các cơ chế phân tử và tế bào của ung thư, bệnh miễn dịch, truyền nhiễm, chuyển hóa, thần kinh và mạch máu
  • Đánh giá hiệu quả điều trị trong tế bào và mẫu bệnh nhân
  • Thử nghiệm các công nghệ nano mới trong các xét nghiệm dựa trên tế bào
  • Đo lường định lượng những thay đổi về hình thái mô và bệnh lý

Tài nguyên được chia sẻ về kính hiển vi huỳnh quang và hình ảnh tế bào cung cấp cho các nhà nghiên cứu UNM quyền truy cập vào thiết bị hiện đại cho nhiều kỹ thuật hiển vi huỳnh quang và hiển vi ánh sáng truyền qua:

  • Các kính hiển vi đơn và đa photon quét bằng laser và hệ thống hình ảnh siêu kính cho phép hiển thị và định lượng đồng thời các vết bẩn mô hóa và nhãn huỳnh quang
  • Các ứng dụng Huỳnh quang phản xạ bên trong toàn bộ (TIRF), Theo dõi một hạt (SPT) và Kính hiển vi cục bộ phân tử đơn (SMLM) để định lượng các sự kiện tế bào sống động và đạt được độ phân giải dưới giới hạn nhiễu xạ của ánh sáng
  • Hình ảnh đo tỷ lệ cho phép định lượng sự thay đổi theo thời gian thực trong nồng độ canxi và các ion khác để phản ứng với tín hiệu tế bào 

Tài nguyên được chia sẻ về kính hiển vi huỳnh quang và hình ảnh tế bào có đội ngũ nhân viên cung cấp điều tra viên:

  • Tham vấn chuyên gia về thiết kế thí nghiệm và chuẩn bị mẫu 
  • Hội thảo
  • Chụp ảnh có tính phí
  • Hỗ trợ đang diễn ra

Diane Lidke, Tiến sĩ; Giám đốc Khoa

Khoa bệnh lý
2325 Camino de Salud, CRF203A
Trung tâm Ung thư Toàn diện UNM
Albuquerque, New Mexico 87131
Điện thoại: (505) 272-8375

Gửi email cho Tiến sĩ Diane Lidke

Keith Lidke, Tiến sĩ; Cố vấn đặc biệt

210 Đại lộ Yale NE, 2218
Tòa nhà Khoa học liên ngành Vật lý và Thiên văn
Albuquerque, New Mexico 87106
Điện thoại: (505) 277-2616

Gửi email cho Tiến sĩ Keith Lidke

Để xác nhận việc sử dụng tài nguyên được chia sẻ này, vui lòng đưa nội dung sau vào các ấn phẩm của bạn:

Nghiên cứu này được hỗ trợ một phần bởi Tổ chức Hỗ trợ Trung tâm Hỗ trợ Ung thư Toàn diện UNM NCI P30CA118100 và sử dụng tài nguyên dùng chung Kính hiển vi huỳnh quang và Hình ảnh tế bào.

Sau khi xuất bản, vui lòng gửi cho chúng tôi một trong những bản in lại hoặc ảnh bìa của bạn để lưu hồ sơ của chúng tôi.

Instrumentation

Vị trí: CRF219

Các chi tiết hệ thống

  • Kính hiển vi đảo ngược Olympus IX83 tùy chỉnh với giai đoạn quét áp điện 3D XYZ của Asylum
  • Đèn LED đa quang phổ Excelitas Turbo (trường rộng) và đèn halogen (trường sáng)  
  • Vật kính ngâm dầu 10X/0.3NA, 20X/0.7NA và 100X/1.4NA
  • Máy ảnh CCD đơn sắc Olympus XM10 
  • Đầu Asylum MFP Origin AFM với phạm vi di chuyển mở rộng cho các chế phẩm sinh học
  • Phần mềm Asylum Research để kiểm soát AFM
  • Phần mềm Olympus cellSens để điều khiển kính hiển vi ánh sáng
  • BioHeater để làm việc với tế bào/mô sống
  • Đầu dò đào tạo được cung cấp trong khi số lượng cuối cùng!
  • Các đĩa tương thích với AFM: Các ngăn dưới cùng của WillCo (mèo Ted Pella #14025-20) và các đĩa nuôi cấy polystyrene của BD Falcon (#351006)
  • Bạn có thể tìm thấy các bề mặt nguyên tử phẳng (mica hoặc HOPG) để quét có độ phân giải cao tại Ted Pella.com - vui lòng liên hệ để được hỗ trợ

Ứng dụng khả thi

  • Chế độ tiếp điểm xoay chiều (AC), hay còn gọi là Chế độ khai thác, để chụp ảnh ở quy mô nanomet ở chế độ khô hoặc ướt
  • Chế độ liên hệ để đo lực cơ học (Mô đun đàn hồi, Độ bám dính, Vết lõm và Lập bản đồ lực) trong chế độ chuẩn bị khô hoặc ướt 

Vị trí: CRF216

Thông tin chi tiết về kính hiển vi

  • Kính hiển vi đảo ngược Leica DMi8 với giai đoạn cơ giới hóa XY
  • Đèn huỳnh quang halogen kim loại & đèn truyền halogen
  • Mục tiêu DIC 10X, 20X Dầu, 25X Nước, 63X Nước & 63X Dầu DIC
  • Kích thích bằng laser cho PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, Rhodamine, & các fluorophores giống Cy5
  • Laser ánh sáng trắng có thể điều chỉnh & xung: 470 - 670 nm
  • Hai tia laser bổ sung: Diode laser 405 nm và một đa giác (các vạch 458, 477, 488, 514 nm)
  • Sáu máy dò: 2 Máy dò Quang phổ Lai * (HyD); 2 SMD phổ ** HyD, 1 PMT phổ chuẩn & 1 PMT truyền (bên ngoài)
  • Giai đoạn Z của Galvo
  • Máy quét cộng hưởng
  • Mô-đun kính hiển vi huỳnh quang suốt đời (FLIM) của Pico Harp 300
  • Phần mềm mua lại LASX
  • Phần mềm FLIM SymphoTime64 (PicoQuant)
  • Phần mềm Huygens Deconvolution
  • Tủ ấm Tokai Hit Stage Top dành cho hình ảnh tế bào sống

* HyDs là máy dò chuyên dụng sử dụng tế bào quang điện GAsP & điốt quang tuyết lở

** Máy dò phân tử đơn (SMD)

Ứng dụng khả thi

  • Các mẫu thử cố định được gắn trên nắp trượt tiêu chuẩn với # 1.5 phiếu trượt bìa
  • Mẫu tế bào sống (LabTekII # 1.5 nhiều giếng hoặc 35 mm (# 1.5) đáy nắp)
  • FLIM FRET (cố định hoặc ô sống)
  • FRET Chấp nhận tẩy trắng (cố định)
  • Phát xạ nhạy cảm FRET (tế bào sống)
  • FRAP (ô sống)
  • Thu thập 3D (Z-Stacks) và hình ảnh Time Lapse
  • Không trộn lẫn đa phổ
  • Khu vực rộng lớn, quét ô đa chiều
  • Độ phân giải siêu cao thông qua xử lý khôi phục hình ảnh (~ 130nm)

Vị trí: CRF226

Thông tin chi tiết về kính hiển vi

  • Kính hiển vi đảo ngược Zeiss AxioObserver với giai đoạn cơ giới hóa XY
  • Đèn huỳnh quang halogen kim loại & đèn truyền halogen
  • Mục tiêu ngâm 10x, 20x, 40x dầu, 63x dầu & 63x
  • DIC khả dụng với các mục tiêu 10x, 20x, 40x & 63x
  • Kích thích bằng laser cho PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, Rhodamine, & các fluorophores giống Cy5
  • Bốn laser trạng thái rắn: 405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm
  • Phát hiện kênh và phổ - Máy dò GaAsP PMT
  • Phát hiện đồng thời ở 3 kênh khả dụng ở chế độ Kênh
  • Máy dò mảng Airyscan cho độ phân giải XY tăng 1.7 lần
  • Máy dò ánh sáng truyền qua
  • Hệ thống ủ tế bào sống: kiểm soát nhiệt độ, độ ẩm và CO2
  • Phần mềm thu nhận hình ảnh Zen Blue

Ứng dụng khả thi

  • Các mẫu thử cố định được gắn trên nắp trượt tiêu chuẩn với # 1.5 phiếu trượt bìa
  • Mẫu tế bào sống (LabTekII # 1.5 nhiều giếng hoặc 35 mm (# 1.5) đáy nắp)
  • FRET Chấp nhận tẩy trắng (cố định)
  • Phát xạ nhạy cảm FRET (tế bào sống)
  • FRAP (ô sống)
  • Thu thập 3D (Z-Stacks) và hình ảnh Time Lapse
  • Không trộn lẫn đa phổ
  • Khu vực rộng lớn, quét ô đa chiều
  • Độ phân giải siêu cao thông qua xử lý khôi phục hình ảnh (~ 130nm)

Vị trí: CRF226

Thông tin chi tiết về kính hiển vi

  • Kính hiển vi đảo ngược Olympus IX83 tùy chỉnh với giai đoạn XY có động cơ ASI với chèn Z piezo.
  • Đèn LED đa phổ Excelitas Turbo (trường rộng) và đèn LED trắng Lumencor (trường sáng)  
  • Dầu 20x / 0.8NA, TIRF dầu 60x / 1.5NA, nước 60x / 1.2NA và vật kính dầu 100x / 1.4NA
  • DIC có khả năng cho quang học 60x và 100x.
  • Bộ điều khiển thời gian thực Olympus cho máy ảnh chính xác theo thời gian và đồng bộ hóa kích thích
  • Đèn chiếu sáng MITICO TIRF 4 vạch laser cho độ sâu ngũ sắc độc lập
  • 4 dòng laser riêng lẻ cho TIRF: 405nm (100mW); 488nm (100mW); 561nm (100mW) và 640nm (140mW)
  • Có thể chụp ảnh tấm kính hiển vi tái tạo quang học Stochastic trực tiếp (dSTORM), kính hiển vi bản địa hóa quang học (PALM) & tấm quang học Laminar có độ nghiêng cao (HILO)
  • Máy ảnh Hamamatsu Fusion sCMOS và bộ tách hình ảnh Geminini W-View cho phép thu nhận tế bào sống đồng thời 2 màu.
  • Tự động lấy nét IR ZDC2 không cản quang cho một lần chụp cực nhanh hoặc lấy nét tự động liên tục 
  • Bộ gia nhiệt vật kính BiopTechs cho các ứng dụng tế bào sống trong thời gian ngắn
  • Phần mềm thu nhận hình ảnh Olympus cellSens Dimension

Ứng dụng khả thi

  • Các mẫu thử cố định với # 1.5H bìa trượt
  • Mẫu tế bào sống (đa giếng LabTekII # 1.5H hoặc đáy nắp 35 mm (# 1.5H))
  • Thu thập 3D (Z-Stacks) và hình ảnh Time Lapse
  • Các ứng dụng cụ thể bao gồm phát hiện phân tử đơn TIRF tế bào sống, HILO, 2D dSTORM hoặc PALM 
  • Xử lý hậu kỳ hỗ trợ GPU do Huygens Localizer cung cấp

Vị trí máy ảnh: CRF218

Thông tin chi tiết về kính hiển vi

  • Kính hiển vi đảo ngược Olympus IX-71
  • Đèn huỳnh quang thủy ngân và đèn truyền halogen
  • Bộ khuếch đại đơn sắc - Dải kích thích 350nm-670nm
  • Laser: 405nm, 488nm, 520nm và 642nm
  • Mục tiêu TIRF 20x, 60x H2O, 100x Oil, 150x Oil
  • Bộ lọc huỳnh quang cho Chấm lượng tử, DAPI, FITC, & các fluorophores giống Rhod, Fura-2, Indo-1
  • Andor IQ Image Acquisition phần mềm
  • Máy sưởi khách quan và Thiết bị Bệnh học Hệ thống ủ tế bào sống với CO2, nhiệt, độ ẩm
  • Giai đoạn cơ giới XYZ
  • Máy ảnh Andor iXon EM-CCD
  • Bộ tách hình ảnh Opti-split (kép)

Ứng dụng khả thi

  • Mẫu cố định được gắn trên các slide
  • Hình ảnh tế bào sống với vật kính ấm hơn
  • Theo dõi hạt đơn
  • Tổng huỳnh quang phản xạ bên trong (TIRF)
  • Hình ảnh tỷ lệ-mét (kích thích kép / phát xạ đơn hoặc phát xạ kép kích thích đơn)
  • Tế bào sống trong nuôi cấy
  • Phổ huỳnh quang trường rộng - có thể có nhiều fluorophores với bộ đơn sắc
  • Z-stacks và chuỗi thời gian

Vị trí máy ảnh: CRF212

Thông tin chi tiết về kính hiển vi 

  • Kính hiển vi huỳnh quang ngược Zeiss AxioObserver
  • Máy ảnh đơn sắc Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS (100 khung hình / giây ở độ phân giải đầy đủ 2048x2048)
  • Đèn huỳnh quang halogen kim loại & đèn truyền halogen
  • Mục tiêu 10x, 20x, 63xDIC Oil và 100x Oil
  • Độ tương phản pha cho các mục tiêu 10x và 20x
  • Bộ lọc huỳnh quang bao gồm: DAPI, FITC, Rhodamine / TRITC / Cy3, Texas Red & Cy5
  • DIC có sẵn với các mục tiêu 63x
  • Vật kính gia nhiệt (vật kính 63x) o Mũi khoét có động cơ để xếp chữ Z
  • Giai đoạn XY có động cơ để thu nhận hình ảnh nhiều vị trí (hình ảnh trôi đi thời gian cố định hoặc tế bào sống)
  • Phần mềm thu nhận hình ảnh SlideBook6

Ứng dụng khả thi 

  • Mẫu cố định được gắn trên các slide
  • Tế bào sống trong đĩa phủ / làm nóng bằng vật kính
  • DIC (không đồng tiêu) với vật kính 63x, kết hợp với huỳnh quang hoặc đơn lẻ
  • Z-stacks, dựng phim và hình ảnh chuỗi thời gian

Nằm trong CRF224 & CRF226

Phần mềm

  • Hình ảnh khối lượng khoa học giải mã Huygens (1)
  • Sách trình chiếu (1)
  • Điều tra viên âm thanh nổi (1)
  • Thần kinh (1)
  • LASX (Leica đồng tiêu) (1)
  • IQTL (Phân tích máy quét bão) (1)
  • Thiền (2)  
  • LSM510 (2)
  • Phần mềm chụp ảnh quang phổ Nuance (2)

Tùy chọn phân tích

  • Đồng bản địa hóa
  • Giải mã
  • Không trộn lẫn quang phổ
  • Phân tích cường độ
  • Phân tích hình thái học
  • Vẽ 3D
  • Đếm đối tượng
  • Theo dõi hạt
  • Chuẩn bị xuất bản

Nằm trong CRF214

Typhoon FLA 7000 là một máy quét laser linh hoạt và nhanh chóng cho các ứng dụng hình ảnh phân tử sinh học bao gồm:

  • các phép đo nhạy cảm và định lượng nhãn đồng vị phóng xạ
  • các đốm màu phương Tây có ánh sáng huỳnh quang
  • huỳnh quang đơn (kích thích nhìn thấy được)
  • tài liệu về các vết ố so màu (ví dụ: gel nhuộm màu xanh và bạc Coomassie)

Nằm trong CRF214

Li-Cor Odessey Fc là một máy quét tia hồng ngoại gần (680nm & 740nm) cho các ứng dụng hình ảnh phân tử sinh học bao gồm:

  • các phép đo nhạy cảm và định lượng của các khối Western blots phát quang hóa học
  • tài liệu về các vết ố so màu (ví dụ: gel nhuộm màu xanh và bạc Coomassie)

Bao gồm các dịch vụ kính hiển vi

  • Tham vấn chuyên gia về thiết kế thí nghiệm và chuẩn bị mẫu
  • Đào tạo người dùng
  • Người vận hành đã hỗ trợ hình ảnh và thu thập dữ liệu sơ bộ cho các đơn xin tài trợ
  • Nhà mở hàng năm để thông báo cho người dùng các bản cập nhật về thiết bị, công nghệ và ứng dụng mới
  • Khóa học kính hiển vi cho sinh viên cao học và nghiên cứu sinh về quang học và chức năng của dụng cụ
  • Hội thảo hàng năm cung cấp cho người dùng mới đào tạo thực hành về chuẩn bị mẫu vật

Chuyển đổi FasLGFP đang khôi phục_20201113_165
Kính hiển vi huỳnh quang phản xạ tổng thể bên trong (TIRF) biểu hiện hoạt động FasL-GFP cơ bản trong tế bào RBL

Dịch vụ và tỷ lệ kính hiển vi

Zeiss AxioObserver - Máy ảnh đơn sắc Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS: $ 7 / giờ

Leica TCS-SP8/FLIM: $ 55 / giờ

Zeiss LSM800: $ 51 / giờ

Kính hiển vi đo tỷ lệ/theo dõi hạt đơn Olympus IX71 (Rm. 218): $25/giờ

Kính hiển vi TIRF/dSTORM của Olympus IX83 (226 Rm): $30/giờ

Nghiên cứu Tị nạn AFM MFP3D BIO (219 Rm): 48 USD/giờ

Đào tạo tất cả các thiết bị, chụp ảnh với người vận hành & đào tạo phân tích: $150/giờ

  • Đồng tâm (4 giờ)
  • Trường ảnh rộng nâng cao (2-3 giờ)
  • Kính hiển vi lực nguyên tử (4-8 giờ)
  • Trường rộng cơ bản (0.5-1 giờ)
  • Hình ảnh với đào tạo người vận hành và phân tích (Phụ thuộc vào dự án)

Tài trợ cơ sở

Tài nguyên được chia sẻ của Đại học New Mexico & Trung tâm Ung thư Hiển vi huỳnh quang ghi nhận khoản tài trợ sau đây để mua thiết bị hoặc hỗ trợ cơ sở vật chất kể từ khi khai trương vào năm 1999.

Nguồn vốn hiện tại

NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) “Tài trợ Hỗ trợ Trung tâm Ung thư UNM” 9/25 / 05-8 / 31/20

NIGMS 5P50 GM085273 (PI Wilson, BS) “Trung tâm mô hình hóa không gian của mạng tín hiệu di động (STMC)” 08/01 / 08-07 / 31/19

STMC P50GM085273: hỗ trợ tài trợ cho Leica TCS-SP8 và Olympus iX71

Tài trợ cho công cụ trong quá khứ

NCRR 1 S10 RR14668 (PI Wandinger-Ness, A.) “Kính hiển vi tiêu điểm Zeiss LSM510 dành cho nghiên cứu khoa học sức khỏe” 04/01 / 00-03 / 31/01

NSF MCB9982161 (PI Wandinger-Ness, A.) “Rab7 và chức năng protein phụ trong quá trình sinh nội bào muộn” (Mua máy ảnh kỹ thuật số Hamamatsu để chụp ảnh tế bào sống) 04/01 / 00-03 / 31/06

NCRR S10 RR016918 (PI Wandinger-Ness, A.) “Zeiss Axiovert 200 cho Dự án hình ảnh tế bào sống” 08/01 / 02-04 / 01/04

NCRR S10 RR19287 (PI Wandinger-Ness, A.) “Máy dò META và Laser 405 nm” 04/01 / 04-03 / 31/05

NCRR 1S10RR025540 (PI Wandinger-Ness, A., co-I Lee, R.) “Kính hiển vi soi nổi đồng bộ cho lõi hiển vi huỳnh quang của UNM” ARRA 05/01 / 09-03 / 31/10

NSF DGE-0549500 (PI Osinski, M. co-I, Oliver Co-PI) “Công nghệ nano cho sinh học tế bào và khoa học thần kinh” (Mua phụ kiện cho Olympus IX71) 6/15 / 06-5 / 31/11

Quỹ gia đình Matthews (PI Lee, R.) “Hệ thống hình ảnh quang phổ Nuance, Cri” 01/01 / 09-12 / 31 / -09

NIDDK 3R301 DK050141 (PI Wandinger-Ness, A.) “Cơ chế bệnh lý của bệnh thận đa nang” Mua Zeiss Axio Observer với giá 510 META) Bổ sung hành chính ARRA 09/30 / 09-09 / 29/11

NCRR P20 RR11830 (PI Oliver, J., đồng PI Eaton, P.) “Tăng cường Nghiên cứu Đa ngành ở New Mexico” 9/30/96 - 9/29/99

NCI R24 CA88339 (PI Sklar, L.) “Tài nguyên được chia sẻ cho nghiên cứu ung thư của UNM” 07/01 / 00-06 / 30/05

NCI P20 CA88807 (PI Willman, C.) “Tài trợ lập kế hoạch cho Trung tâm Ung thư Đại học New Mexico” 07/01 / 00-06 / 30/05

Tài trợ nội bộ 1999-nay: $ 437,266

Trung tâm Khoa học Y tế Đại học New Mexico

Trung tâm Ung thư Đại học New Mexico

Trường Đại học Y New Mexico Khoa Bệnh lý